ABSTRACT The urgent need to develop and produce safe and effective vaccines to guarantee the reduction of the spread of the type 2 coronavirus that causes severe acute respiratory syndrome, led the Center for Molecular Immunology and the Finlay Vaccine Institute to develop two vaccines and one candidate vaccine to combat the 2019 coronavirus pandemic. As part of the establishment of the production process, experiments were carried out on the possible steps of the purification process of the receptor binding domain molecule (aa 319-541) with a view to its subsequent technological transfer on an industrial scale. This molecule is fused with a hexahistidine tag at its C-terminal end and has nine cysteine residues in its sequence that form four intramolecular disulfide bonds; leaving a free cysteine that allows two molecules to be obtained: dimeric and monomeric, which constitute the antigens of the SOBERANA®02 and SOBERANA®Plus vaccines and the SOBERANA 01 vaccine candidate. The best adsorption conditions of the chromatographic matrices of affinity for metal chelates, cationic exchange and molecular exclusion were determined. The performance of the process was evaluated on a pilot scale and the molecule was characterized according to its physical-chemical and biological properties. The results obtained showed a 60.02 ± 5.15% total recovery of the protein of interest with more than 98% purity in both molecules, an efficient removal of contaminants and an antigenicity greater than 90% referred to the control monomer of the domain receptor binding with 99% purity; which demonstrates that the established process is efficient in obtaining a product with the required quality.

RESUMEN La urgente necesidad de desarrollar y producir vacunas seguras y efectivas para garantizar la reducción de la propagación del coronavirus de tipo 2 causante del síndrome respiratorio agudo severo, hizo que el Centro de Inmunología Molecular y el Instituto Finlay de Vacunas, desarrollaran dos vacunas y un candidato vacunal contra la COVID-19, que tienen como componente la molécula del dominio de unión al receptor (aa 319-541) del virus. Para establecer el proceso productivo, se realizaron experimentos en los posibles pasos del proceso de purificación de la molécula del dominio de unión al receptor (aa 319-541), con vistas a su posterior transferencia tecnológica a escala industrial. Dicha molécula está fusionada con una etiqueta de hexahistidina en su extremo C-terminal y presenta nueve residuos de cisteína en su secuencia que forman cuatro enlaces disulfuros intramoleculares, quedando una cisteína libre que permite obtener dos moléculas: dimérica y monomérica, antígenos que forman parte de las vacunas SOBERANA®02 y SOBERANA®Plus y el candidato vacunal SOBERANA 01. Se determinaron las mejores condiciones de adsorción de las matrices cromatográficas de afinidad por quelatos metálicos, intercambio catiónico y exclusión molecular. Se evaluó el desempeño del proceso a escala piloto y se caracterizó la molécula de acuerdo a sus propiedades físico-químicas y biológicas. Los resultados obtenidos mostraron un 60,02 ± 5,15% de recuperación total de la proteína de interés, con más del 98% de pureza en ambas moléculas, una eficiente remoción de contaminantes y una antigenicidad mayor del 90% referido al monómero control del dominio de unión al receptor con 99% de pureza, lo que demuestra que el proceso establecido es eficiente en la obtención de un producto con la calidad requerida.

Abstract The COVID-19 pandemic has caused a large number of diseases worldwide. There are few vaccines to constrain this disease and the value of them is high. In this sense, the antigens of the vaccine platform Soberana, the receptor binding domain from SARS-CoV-2 Spike protein, both the monomeric (mRBD) and dimeric (dRBD) forms, have been developed. This study encompassed several analyses by different techniques like circular dichroism (CD), fluorescence spectroscopy (FS) and Gel Filtration- High Performance Liquid ChLC of mRBD and dRBD. Monomer and dimer exhibited similar far-UV CD spectral characteristics with 54% of β-sheet content. Similar conformational features according to near-UV CD and FS studies were observed in both RBD. Stress stability studies by far-UV CD, FS, biological activity and GF-HPLC at 37 °C showed that mRBD is very stable. On the other hand, dRBD fluorescent emission showed a shift towards higher wavelengths as the incubation time increases, suggesting exposition of tryptophan residues, unlike what happens with mRBD. Biological activity outcome confirms these results. GF-HPLC profiles showed that in mRBD, the product of molecular stress are dimers and does not increase over time. However, dRBD showed dimer fragmentation as the main degradation species. This study reveals the usefulness of CD techniques for the analysis of degradation of RBD molecules as well as showed the difference in stability of both RBD molecules. Besides, our work provides useful insights into the production of a key protein used in diagnosis and therapeutics to fight COVID-19 pandemia.

ABSTRACT Introduction: NeuroEPO is a non-hematopoietic variant of human recombinant erythropoietin, which may have a hypoglycemic effect. Objectives: To evaluate the influence of NeuroEPO on glycemia in diabetic and non-diabetic rats. Material and Methods: The experiments were conducted in Wistar rats with streptozotocin-induced diabetes with and without insulin treatment, and in non-diabetic rats with glucose overload. In each experiment, one group received a subcutaneous injection of NeuroEPO (0.5 mg/kg) and the other group received a vehicle. Glycemia was determined in 120 min. Comparisons were made using one-and two-way analysis of variance, followed by the Bonferroni test. The differences were considered significant with p values < 0,05. Results: In diabetic rats without insulin treatment, glycemic levels decreased significantly in the group that received NeuroEPO. In nondiabetic rats that received NeuroEPO and a glucose overload, glycemia was similar to that in the control group. In diabetic rats that received NeuroEPO and insulin, the glycemia reduction was greater than in the group that only received insulin. Conclusions: NeuroEPO has a hypoglycemic effect in diabetic rats due to an insulinotropic mechanism that shows synergism with insulin in the treatment of hyperglycemia. However, NeuroEPO does not influence the glucose tolerance in non-diabetic rats, at least immediately. It is necessary to delve into the mechanisms by which NeuroEPO can reduce hyperglycemia and the influence of this substance under conditions of normoglycemia.

RESUMEN Introducción: La NeuroEPO es una variante no-hematopoyética de la eritropoyetina recombinante humana, que pudiera tener efecto hipoglicemiante. Objetivo: Evaluar la influencia de la NeuroEPO sobre la glicemia de ratas con diabetes mellitus y ratas no-diabéticas. Material y Métodos: Se realizaron experimentos en ratas Wistar con diabetes inducida por estreptozotocina, con y sin tratamiento con insulina, y en ratas no-diabéticas con una sobrecarga de glucosa. En cada experimento, un grupo recibió una inyección subcutánea de NeuroEPO (0,5 mg/kg) y otro el vehículo, y se determinó la glicemia durante 120 minutos. Se realizaron comparaciones mediante análisis de varianza de una y dos vías, seguidas por la prueba de Bonferroni. Las diferencias se consideraron significativas con valores de p < 0,05. Resultados: En las ratas diabéticas sin tratamiento con insulina, los niveles de glicemia del grupo con NeuroEPO disminuyeron de forma significativa. En las ratas no-diabéticas que recibieron NeuroEPO y una sobrecarga de glucosa, la glicemia fue similar al grupo control. En las ratas diabéticas que recibieron NeuroEPO e insulina la reducción de la glicemia fue mayor que en el grupo que solo recibió insulina. Conclusiones: La NeuroEPO tiene un efecto hipoglicemiante en ratas diabéticas, por un mecanismo insulinotrópico que muestra sinergismo con la insulina en el tratamiento de la hiperglicemia. Sin embargo, la NeuroEPO no influye en la tolerancia a la glucosa de ratas no-diabéticas, al menos de forma inmediata. Es necesario profundizar en los mecanismos mediante los cuales la NeuroEPO puede reducir la hiperglicemia, y la influencia de esta sustancia en condiciones de normoglicemia.

ABSTRACT Introduction: Obesity, especially visceral, is a major risk factor for several diseases such as Type 2 diabetes mellitus, cardiovascular diseases, atherosclerosis, dyslipidemia, non-alcoholic fatty liver disease, and cancer. Oxidative stress may be a unifying mechanism for the development of major obesity-related comorbidities. Objective: To evaluate the prooxidant-antioxidant balance in monosodium glutamate-induced obesity in Wistar rats (MSG- obese rats). Material and Methods: Female Wistar rats received subcutaneous (sc) injections of monosodium glutamate solution (4 mg/g of body weight) or vehicle (NaCl 0,9 %; control) to induce obesity during the neonatal period. At 90 days of life, obesity was determined. At 180 days of life, rats were anesthetized and killed to obtain blood and liver samples for the determination of biochemical markers. Results: MSG obese rats presented significantly higher triglycerides, uric acid and insulin levels, as well as elevated HOMA and TyG indexes. Increased concentrations of nitrate and nitrite, 2-deoxyribose oxidation products and advanced oxidation protein products levels were observed in obese rats. Conclusions: Obesity induced by monosodium glutamate reproduces the main metabolic alterations associated with human visceral obesity, among which oxidative stress is included. This model may be useful for the evaluation of therapeutic strategies to prevent or decrease complications associated with obesity.

RESUMEN Introducción: La obesidad, especialmente la visceral, constituye un factor de riesgo principal para múltiples enfermedades tales como: diabetes Mellitus tipo 2, enfermedades cardiovasculares, aterosclerosis, dislipidemias, enfermedad por hígado graso no alcohólico y cáncer. Se plantea que el estrés oxidativo podría ser el factor causal común de las comorbilidades asociadas a la obesidad. Objetivo: Evaluar el balance prooxidante/antioxidante en ratas con obesidad inducida con glutamato monosódico. Material y Métodos: Ratas Wistar hembras recibieron glutamato monosódico (4 mg/g de peso corporal) para inducir obesidad o NaCl 0,9 % (Controles) subcutáneamente en período neonatal. A los 90 días, se confirmó la obesidad. Se les practicó eutanasia a los 180 días para la obtención de sangre e hígado para la determinación de marcadores bioquímicos. Resultados: Las ratas obesas presentaron niveles incrementados de TAG, AU, insulina e índices HOMA y TyG. Se constataron mayores concentraciones de nitratos y nitritos, productos avanzados de la oxidación de proteínas y productos de oxidación de la 2-desoxirribosa en el ADN en las ratas obesas. Conclusiones: Se concluye que la obesidad inducida con glutamato monosódico reproduce las principales alteraciones metabólicas asociadas a la obesidad visceral humana, dentro de las que se incluye el estrés oxidativo. Este modelo podría ser útil en la evaluación de estrategias terapéuticas para prevenir o disminuir complicaciones asociadas a la obesidad.

ABSTRACT Introduction: Direct vaginal cytology is a widely used method for the evaluation of the estrous cycle of laboratory rats, but the information about the procedures and interpretation of results is dispersed through literature, making its use difficult in investigations on reproduction. Objective: To propose a protocol for performing direct vaginal cytology of laboratory rats as well as for the interpretation of the results. Material and methods: The information obtained from literature and the experience of 10 years of investigation on reproduction in 250 female Wistar rats were combined following the established ethical principles. The procedures for obtaining samples by vaginal washing and by observation and analysis in humid state with light microscope equipped with digital camera were described. Results: The main types of cells present in the vaginal washing and the characteristics that allow us to identify each phase or transitional phases of the estrus cycle are described. Aspects to take into consideration in the interpretation of the results, which include the association between hormonal changes, the cares in the obtaining of the sample and the influence of environmental factors, are discussed. Representative images and figures are included to illustrate the text. Conclusions: The work consists of a study protocol of the estrus cycle of laboratory rats by direct vaginal cytology. It provides noninvasive, simple and cost-reducing procedures as well as essential knowledge for the interpretation of results which integrate a very useful guideline for experimental investigations on reproduction.

RESUMEN Introducción: La citología vaginal directa es un método muy utilizado para la evaluación del ciclo estral de las ratas de laboratorio, pero la información acerca de los procedimientos e interpretación de los resultados aparece disgregada en la literatura, lo cual dificulta su empleo en los estudios de reproducción. Objetivo: Proponer un protocolo para la realización de la citología vaginal directa de ratas de laboratorio y la interpretación de los resultados. Material y métodos: Se combinó la información de la literatura y la experiencia de 10 años de estudios de reproducción, en los que se han empleado un total de 250 ratas Wistar hembras, siguiendo preceptos éticos establecidos. Se describen los procedimientos para la obtención de las muestras, mediante lavado vaginal, así como para su observación y análisis en estado húmedo, con microscopio óptico y cámara digital acoplada. Resultados: Se describen los tipos celulares principales presentes en el lavado vaginal y las características que permiten identificar cada fase o estado de transición del ciclo estral. Se discuten aspectos a considerar en la interpretación de los resultados, que incluye la relación con los cambios hormonales, los cuidados en la obtención de la muestra y la influencia de factores ambientales. Se muestran imágenes y figuras representativas para ilustrar el texto. Conclusiones: El trabajo constituye un protocolo para el estudio del ciclo estral de ratas de laboratorio, mediante la citología vaginal directa. Provee métodos no invasivos, sencillos y económicos, así como conocimientos esenciales para la interpretación de los resultados, que integran una guía de gran utilidad para los estudios experimentales de reproducción.

Background: Obesity is a risk factor for multiple diseases. There are various rat models to induce this condition. Genetic models and diet-induced obesity are expensive. Within the models of hypothalamic obesity, there is one achieved by the administration of monosodium glutamate during the neonatal period. This substance is not expensive and causes the major metabolic alterations observed in human obesity. Objective: to select an appropriate treatment scheme to induce obesity with monosodium glutamate during neonatal period. Methods: monosodium glutamate was administered to Wistar rats during the neonatal period, using three different treatment schemes (with five, seven and ten doses) of 4mg/g/day through two routes of administration: subcutaneous and intraperitoneal routes. Controls were administered 0.9% sodium chloride. To establish the diagnosis of obesity, the following variables were measured at 90 days: weight, snout-anus length and Lee index. Results: with all treatment schemes tested, snout-anus length was statistically different between the group treated with monosodium glutamate and the controls group. 100% of the rats that reached adulthood injected with monosodium glutamate was obese. Conclusion: the scheme of five doses of monosodium glutamate, applied subcutaneously on alternate days, was selected as obesity is obtained with less handling and lower percentage of neonatal deaths.

Fundamento: La obesidad es un factor de riesgo para múltiples enfermedades. Existen diversos modelos en ratas para inducir obesidad. Los modelos genéticos y la obesidad inducida por la dieta son costosos. Dentro de los modelos hipotalámicos de obesidad está el que se logra mediante la administración de glutamato monosódico en período neonatal. Esta sustancia no es costosa y produce las alteraciones metabólicas más importantes que se ven en la obesidad humana. Objetivo: seleccionar un esquema de tratamiento adecuado para inducir obesidad con glutamato monosódico en ratas Wistar en periodo neonatal. Métodos: se administró glutamato monosódico a ratas Wistar en período neonatal, siguiendo tres esquemas diferentes de tratamiento (con cinco, siete y diez dosis), a 4mg/g/día, y mediante dos vías de administración: subcutánea e intraperitoneal. A los controles se les administró cloruro de sodio al 0,9 %. Para realizar el diagnóstico de obesidad, a los 90 días se evaluaron las variables: peso, longitud hocico-ano e índice de Lee. Resultados: con todos los esquemas de tratamientos ensayados, la longitud hocico-ano resultó diferente estadísticamente entre el grupo tratado con glutamato monosódico y los controles. El 100 % de las ratas que alcanzaron la adultez, inyectadas con glutamato monosódico, se hicieron obesas. Conclusión: el esquema con cinco dosis de glutamato monosódico, aplicado en días alternos por vía subcutánea, fue seleccionado por desarrollarse la obesidad con menor manipulación y menor porcentaje de muertes neonatales.

Introduction: experimental models have obtained good results with the supplementation of antioxidants in the prevention of the diabetic embryopathy. However, not always the effect is beneficial and the mechanism of these results is unclear. T Objective: was to evaluate the effect of nutritional supplementation with vitamin E during gestation on offspring of diabetic rats. Materials and Methods: we used wistar rats with diabetes induced by streptozotocin and health rats like controls. During gestation, one group of diabetic rats and one group of controls received vitamin E 150mg/kg/day, and the others group the vehicle. Euthanasia was practiced at 11,5 day of pregnancy and we study the morphology of the products, DNA, proteins and oxidative stress markers in embryos. The statistic analyze was performed with non parametric tests and the significant differences were considered with p< 0, 05. Results: in diabetic rats with vitamin E the embryos were higher and decreased the number of resorptions, the developmental impairment and the content of oxidative damage markers to lipids and proteins in the embryos. Conclusions: nutritional supplementation with vitamin E during gestation in diabetic rats decreased the loss of the conception products, increased the growth and development of the embryos with decreased oxidative damage to biomolecules that will be suggest a beneficial antioxidant effect of the vitamin.

Introducción: en modelos experimentales se han obtenido resultados prometedores con el empleo de suplementos antioxidantes en la prevención de la embriopatía diabética. Sin embargo, no siempre el beneficio es claro y queda por aclarar el mecanismo que subyace en esos resultados. Objetivo: evaluar el efecto de la suplementación nutricional con Vitamina E durante la gestación en la descendencia de ratas diabéticas. Materiales y Métodos: se emplearon ratas con diabetes inducida por estreptozotocina y ratas sanas como controles. Durante la gestación, un grupo de ratas diabéticas y uno de controles recibieron 150 mg/kg/día de vitamina E y los otros grupos el vehículo, hasta el día 11,5 en el que se practicó eutanasia. Se realizó el análisis morfológico de la descendencia y la determinación del contenido de ADN, proteínas y marcadores de estrés oxidativo en embriones. Para el análisis estadístico se emplearon pruebas no paramétricas y las diferencias se consideraron significativas con p < 0,05. Resultados: en las ratas diabéticas tratadas con Vitamina E se observó menor número de reabsorciones y los embriones tuvieron mayor talla, así como, menor retraso del desarrollo, severidad de las malformaciones y contenido de marcadores de daño oxidativo a proteínas y lípidos. Conclusiones: la suplementación nutricional con Vitamina E durante la gestación en ratas diabéticas disminuyó las pérdidas del producto de la concepción y favoreció el crecimiento y desarrollo de los embriones con menor daño oxidativo a biomoléculas que pudieran sugerir un efecto antioxidante beneficioso de esta vitamina.

Hyperglycemia characteristic of diabetes mellitus triggers pathological processes in fetal development of various structures such as the retina, peripheral nerves, renal glomerulus, and arterial and venous beds. Women with diabetes prior to conception have children with birth defects three to five times more frequently than women without diabetes. There is no specific pattern of birth defects, but the central nervous and cardiovascular systems are the most affected. Hyperglycemia leads to mitochrondrial superoxide radical production, which activates five metabolic pathways that mediate damage leading to diabetic embryopathy. Once oxidative stress is established, there is modification of gene expression controlling embryonic development in critical periods. Vitamin E application in animal models has greatly lowered occurrence of birth defects in embryonic and fetal stages, consistent with an etiologic role for oxidative stress in dysmorphogenesis. Effective metabolic control before and during pregnancy, achieved in Cuba by implementing programs for control of birth defects in children of diabetic pregnant women, has been found effective.

Introduction: The management of oxidative stress in diabetic pregnants could be beneficial to prevent complications like the congenital malformations. However, there is not a consensus as regards the relevance of applying antioxidant therapies before or during pregnancy. The ambiguity of some results as regard the real damage on biomolecules could be the cause of such disagreement. The aims of present study were to assess the state of the markers of oxidative damage to biomolecules and the antioxidant defence in diabetic pregnants, as well as to analyze the influence of the type of diabetes on the REDOX state during pregnancy. Methods: Thirty two diabetic pregnants (15 with pregestational diabetes and 17 with gestational diabetes) and 27 healthy pregnants with an average pregnant time higher than 20 weeks. Markers were assessed using spectrophotometry and high-performance liquid chromatography techniques. Results: There was oxidative damage to genetic material and proteins together with a decrease also significant in antioxidant defenses mediated by the reduced glutathione in pregestational diabetic pregnants. The nitrates and nitrites levels were not different among groups. Conclusions: Results allowed us to make sure that women with pregestional diabetes had a oxidative stress state deteriorating the antioxidant defenses and not counteract the oxidative damage to biomolecules.

Introducción: El manejo del estrés oxidativo en la embarazada diabética podría ser beneficioso en la prevención de complicaciones como las malformaciones congénitas. Sin embargo, no existe un consenso en cuanto a la pertinencia de aplicar terapias antioxidantes previamente o durante la gestación. La ambigüedad de algunos resultados en cuanto al daño real sobre las biomoléculas pudiera ser la causa de tal desacuerdo. El estudio tuvo como objetivos evaluar el estado de marcadores de daño oxidativo a biomoléculas y de defensa antioxidante en embarazadas diabéticas, así como analizar la influencia del tipo diabetes en el estado REDOX durante la gestación. Métodos: Se estudiaron 32 embarazadas diabéticas (15 con diabetes pregestacional y 17 gestacional) y 27 sanas, con un tiempo de gestación promedio superior a 20 semanas. Los marcadores se evaluaron por técnicas espectrofotométricas y cromatografía líquida de alta presión. Resultados: se pudo asegurar daño oxidativo al material genético y a proteínas, unido a una disminución también significativa de las defensas antioxidantes mediadas por el glutatión reducido en las embarazadas con diabetes pregestacional. Los niveles de nitratos y nitritos no mostraron diferencias entre los grupos. Conclusiones: los resultados permiten asegurar una vez más que las mujeres con diabetes pregestacional presentan un estado de estrés oxidativo que deteriora las defensas antioxidantes y no logra contrarrestar el daño oxidativo a biomoléculas.

Xenogenous DNA used as coating of an indirect enzyme-immunoassay for detection of IgG to double-chain DNA is very difficult to obtain and it is very expensive. OBJECTIVE: To assess usefulness of allogenic and autologous DNA coating antigen to determine these antibodies. METHODS: We used as coating the DNA from calf thymus, DNA from two subjects supposedly healthy, and DNA from 4 patients diagnosed with systemic lupus erythematosus (DLE), Analysis of antibodies presence was carried out in serum from 4 sick subjects. RESULTS: We achieved a 100% of coincidence in results, as well as a few differences in method discrimination ability using the three types of DNA. CONCLUSIONS: Human DNA (allogenic and autologous) is also useful as coating of this enzyme-immunoassay that the xenogenous DNA one.

El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un enzimoinmunoensayo indirecto, para la detección de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena es de difícil obtención y muy costoso. OBJETIVO: evaluar la utilidad del ADN alógeno y autólogo como antígeno de recubrimiento para determinar estos anticuerpos. MÉTODOS: se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera, ADN de dos sujetos supuestamente sanos y ADN de cuatro pacientes con diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de los cuatro individuos enfermos. RESULTADOS: se obtuvo un 100 % de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los tres tipos de ADN. CONCLUSIONES: el ADN humano (alógeno y autólogo) es igualmente útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo que el ADN xenógeno.

Obtaining of the xenogenic DNA used as coat of a indirect enzymoimmunoassay, to determine IgG antibodies to double-chain DNA is difficult, and also it is very expensive. Thus, aim of this paper is to valuate usefulness of allogenic DNA as coat antigen to detect these antibodies. As coat we used DNA from calf thymus, and DNA from 6 subjects supposedly healthy. Analysis of presence of antibodies war carried out in sera from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. There was a 100% of coincidence in results, as well as a few differences in discrimination ability of method using the two types of DNA. According above mentioned, we conclude that human DNA is useful as coat of this enzymoimmunoassay. Achievement of such antigen is less expensive than that of DNA from calf thymus.

El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un inmunoensayo enzimático indirecto, para la determinación de anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena, es de difícil obtención y muy costoso. Por tal motivo, el objetivo del presente trabajo es evaluar la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar estos anticuerpos. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico. Se obtuvo un 100% de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los dos tipos de ADN. Según lo anterior se concluye que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de dicho antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera

The usefulness of allogenous DNA as a coating antigen to detect IgG antibodies versus dsDNA was evaluated. The xenogenous DNA used as a coating of an indirect immunoenzimatic assay for determining these antibodies is difficult to obtain and very expensive. Calf thymus DNA and DNA from 6 apparently sound subjects was utilized for coating. The analysis of the presence of antibodies was made in serum from 16 individuals with diagnosis of systemic lupus erythematosus. 100 % of coincidence was obtained in the results. A few differences in the discrimination capacity of the method with the use of two DNA types were observed. According to the above, it was concluded that human DNA is useful as a coating of this enzymoimmunoassay. The obtention of such antigen cost less than that of the calf thymus.

Se evaluó la utilidad del ADN alógeno como antígeno de recubrimiento para detectar los anticuerpos IgG contra el ADN de doble cadena. El ADN xenógeno empleado como recubrimiento de un enzimoinmunoensayo indirecto, para la determinación de estos anticuerpos, es de difícil obtención y muy costoso. Se empleó como recubrimiento ADN de timo de ternera y ADN de 6 sujetos supuestamente sanos. El análisis de la presencia de los anticuerpos se realizó en suero de 16 individuos con diagnóstico de lupus eritematoso sistémico. Se obtuvo 100 % de coincidencia en los resultados, así como pocas diferencias en la capacidad de discriminación del método con el empleo de los 2 tipos de ADN. Según lo anterior se concluyó que el ADN humano es útil como recubrimiento de este enzimoinmunoensayo. La obtención de este antígeno es menos costosa que la del ADN de timo de ternera.

A conjugate was prepared for the determination of antibodies against the surface antigen of hepatitis B virus by double Ag sandwich ELISA. Peroxidase, the antigen of the Cuban vaccine against hepatitis B, and the periodate-conjugation method were used. The enzymatic activity, the immunological activity and the specific conjugate activity were evaluated. The enzyme and the antigen conserved their activity after conjugation, and the optimal working dilution 1/200 was selected. It was concluded that the conjugate obtained had an adequate specificity, detectability and reactivity, and could be considered apt for its use.

Se preparó un conjugado para la determinación de anticuerpos contra el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B por inmunoensayo enzimático tipo sandwich de doble Ag. Se utilizó la peroxidasa, el antígeno de la vacuna cubana contra la hepatitis B y el método de conjugación del periodato. Se evaluó la actividad enzimática, la actividad inmunológica y la actividad específica del conjugado. La enzima y el antígeno conservaron su actividad luego de la conjugación y se escogió la dilución óptima de trabajo 1/200. Se concluyó que el conjugado obtenido presentaba adecuada especificidad, detectabilidad y reactividad, y podía considerarse apto para su utilización.

A conjugate was prepared and evaluated for the detection of hepatitis B virus surface antigen by double antibody sandwich ELISA. Donkey polyclonal antibodies against the hepatitis B virus surface antigen, peroxidase and the periodate conjugation method were used. The enzymatic, immunological and specific activity of the conjugate were evaluated. The enzyme and the antibodies conserved their activity after conjugation, and the dilution range 1/400-1/1400 was chosen as optimal for the work. It was concluded that the conjugate obtained presented an adequate specificity, detectability and reactivity, and that it could considered apt for its use.

Se preparó y evaluó un conjugado para la detección del antígeno de superficie del virus de la hepatitis B por inmunoensayo enzimático tipo sandwich de doble anticuerpo. Se utilizaron anticuerpos policlonales de burro contra el antígeno de superficie del virus de la hepatitis B, la peroxidasa y el método de conjugación del periodato. Se evaluó la actividad enzimática, la actividad inmunológica y la actividad específica del conjugado. La enzima y los anticuerpos conservaron su actividad luego de la conjugación y se escogió el rango de diluciones 1/400-1/1 400 como óptimo para el trabajo. Se concluyó que el conjugado obtenido presentaba adecuada especificidad, detectabilidad y reactividad, y podía considerarse apto para su utilización.

An analytical stage algorithm was proposed for evaluating the immunoenzymatic conjugates. They should be evaluated in the system where they are going to be used. This procedure has the limitation that if some deficiencies are detected it is not possible to identify whether they are produced by alterations of the enzyme, or of the molecule conjugated to it. The conservation of the enzymatic and immunological activity are key requirements in the obtention of a good conjugate. The algorithm starts with the enzymatic evaluation followed by immunological appraisal and, finally, by the assessment of the specific activity of the product as a conjugate. This methodology may also be a way of saving time and resources, once the reference values for the work are established. It was concluded that the proposed analytical algorithm may be a suitable procedure for the adequate characterization of immunoenzymatic conjugates.

Se propuso un algoritmo analítico por etapas para la evaluación de conjugados inmunoenzimáticos. Estos deben ser evaluados en el sistema donde van a ser empleados. Esta forma de proceder tiene la limitación de que si se detectan deficiencias no es posible identificar si son producidas por alteraciones de la enzima o de la molécula conjugada a esta. La conservación de la actividad enzimática e inmunológica son requerimientos claves en la obtención de un buen conjugado. Este algoritmo se inicia con la evaluación enzimática seguida de la evaluación inmunológica y finalmente de la evaluación de la actividad específica del producto como conjugado. Esta metodología pudiera constituir además una forma de ahorro de tiempo y recursos, una vez que se establezcan valores de referencia para el trabajo. Se concluyó que el algoritmo analítico propuesto pudiera ser un procedimiento apropiado para la caracterización adecuada de conjugados inmunoenzimáticos.